【细胞名称】人永生化角质形成细胞

【细胞别名】HaCAT; HACAT; Hacat

【种属来源】人

【组织来源】黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤

【细胞形态】上皮细胞样

【生长特性】贴壁生长

【培养体系】DMEM+10% FBS+1% P/S

【传代比例】1:2-1:4，每 2-3 天换液一次

【培养条件】气相：95%空气+5%二氧化碳，温度：37℃

【冻存条件】冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO；存储条件：液氮

【安全性】建议在一级生物安全台内操作，并做好个人防护。

【用途】仅供科研使用

二、复苏及传代方法

1、细胞株的复苏（冻存管）

（1）将冻存管在37℃水浴锅中迅速完全融化，并适当轻轻摇晃促融。快速、完全融化可以提高细胞的复苏效果。

（2）打开冻存管前时用75%酒精擦拭细胞冻存管外壁。

（3）将完全融化的细胞直接离心，或者转移至无菌15ml或其它合适无菌离心管中，400g离心5min，吸除上清，注意不要吸走细胞沉淀，然后用新鲜完全培养液重悬后转移至培养器皿，混匀，置于CO2培养箱37℃培养。

（4）第二天视贴壁或生长状态，更换培养液。

注意：如果收到的冻存管不能及时进行复苏，还请置于-80℃或液氮中进行暂存，并尽快复苏进行培养。

2、细胞株的复苏（T25瓶）

（1）将收到T25瓶脱外包后用75%酒精擦拭瓶外壁。

（2）置于倒置显微镜下观察细胞状态，看是否有异常；无异常后，采用移液器移去多余的培养液，置于CO2培养箱37℃培养过夜。

（3）第二天视贴壁或生长状态，考虑进行换液或传代，传代比例参考1:2~1:4。

三、注意事项

1、每支冻存管约含1×106个细胞，体积为1ml，预期存活率60-90%，建议复苏至1个T25瓶或1个6cm培养皿中。如果复苏后存活率较低，可以消化后转移至3.5cm培养皿/T12.5瓶中，这样细胞生长会更好

2、如果本产品是常温运输，并且是培养瓶中充满完全培养液的贴壁细胞，收到细胞后：

（1）及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

（2）用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2~4小时，以便稳定细胞状态。

（3）仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息。

（4）静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态。

3、如果细胞密度超过85%请尽快进行传代操作；如果悬浮的细胞较多，请将培养瓶置于培养箱中静置过夜以使悬浮的细胞再次贴壁。如果收到的是常温运输的离心管装的悬浮细胞，可以直接取出转移至培养皿或培养瓶中培养。若培养液颜色正常则保留培养液继续培养，并且在首次更换培养液时，保留一半原培养液，并加入一半新鲜培养液，这样可以尽量避免由于培养液或血清差异导致细胞生长的不适应，确保细胞良好的生长状态。

4、细胞培养请在生物安全柜台中进行操作，并严格遵守无菌操作。